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技術資訊
Technical Information李芙燕1 ,陳耀星1 3 ,王子旭1 ,王青麗1 ,咼于明2 ,張龍超2
(1. 中國農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學院,北京100094 ,2. 中國農(nóng)業(yè)大學動物科技學院,北京100094)
中圖分類號:S816. 7 文獻標識碼:A 文章編號:100725038 (2006) 0220065204
摘 要:將20 只1 日齡健康AA 肉雞隨機分為4 個處理組:對照組(基礎日糧) ,硫酸抗敵素組(基礎日糧+ 硫酸抗敵素100 mg/ kg) ,幼康寶組(基礎日糧+ 幼康寶500 mg/ kg) 和丁酸鈉組(基礎日糧+ 丁酸鈉500 mg/ kg) 。試驗7 周后,采用組織學技術,研究了肉雞小腸肥大細胞的形態(tài)及數(shù)量分布。結果顯示,①比較各試驗組和對照組,小腸肥大細胞的形態(tài)沒有明顯的變化,多存在于腸腺周圍和腸絨毛固有層。②各試驗組的小腸肥大細胞數(shù)量均高于對照組(0. 1 %～30 %) ,而且在各試驗組中又以丁酸鈉組的肥大細胞數(shù)最多,硫酸抗敵素組次之,幼康寶組最少。③各試驗組和對照組小腸肥大細胞數(shù)均從前向后逐漸減少,十二指腸的肥大細胞最多,空腸的次之,回腸的較少。3 種添加劑均可不同程度地促進肉雞小腸肥大細胞的增殖,提高小腸黏膜免疫水平,并且丁酸鈉的效果明顯優(yōu)于硫酸抗敵素和幼康寶。
關鍵詞:飼料添加劑;肥大細胞;黏膜免疫;小腸;肉雞
抗生素具有促進動物生長、預防病原微生物感染和疾病發(fā)生等方面的重要作用,而被作為飼料添加劑廣泛應用于動物生產(chǎn)中。然而,隨著抗生素的長期使用,人們逐漸發(fā)現(xiàn)使用抗生素存在的諸多負面效應,如動物產(chǎn)品中藥物殘留、病原菌的耐藥性增加等。為了少用或不用抗生素作為飼料添加劑,許多科研工作者開始致力于抗生素替代品的研發(fā)。在此過程中人們發(fā)現(xiàn)飼料中添加中草藥幼康寶可以防治疾病, 提高機體免疫力,促進畜禽生長,并且解決了抗生素、激素等藥物添加劑無法解決的藥物殘留問題。另外,在畜禽日糧中添加酸化劑丁酸鈉也可以促進動物生長,提高飼料轉化率,改善動物腸道內(nèi)微生物區(qū)系,以及調(diào)整動物腸道菌群的生態(tài)平衡,提高其機體免疫力。因此,中草藥和酸化劑作為新的添加劑以替代抗生素已引起了人們的極大關注,但對于飼料添加劑幼康寶和丁酸鈉的研究主要集中于對動物生長和生產(chǎn)的影響,而對腸道黏膜免疫影響的研究較少。為此,本試驗擬研究幼康寶和丁酸鈉對與肉雞小腸黏膜免疫相關的肥大細胞的影響,并與硫酸抗敵素的作用相比較,從而為科學使用這兩種飼料添加劑來替代抗生素硫酸抗敵素的可行性提供形態(tài)學依據(jù)。
1、材料與方法
1. 1 實驗動物的分組與飼養(yǎng)
將20 只1 日齡健康AA 肉雞隨機分成4 組,即對照組(基礎日糧) ,硫酸抗敵素組(基礎日糧+ 硫酸抗敵素100 mg/ kg) ,幼康寶組(基礎日糧+ 幼康寶500 mg/ kg) 和丁酸鈉組(基礎日糧+ 丁酸鈉500mg/ kg) ,每組5 只。
硫酸抗敵素:市售,日本旭化成工業(yè)株式會社生產(chǎn)的硫酸黏桿菌素10 %預混劑,2001 年外獸藥準字02 號;幼康寶:武漢泛華生物技術有限公司開發(fā)研制,主要成分為黃芩的有效成分的提取物;丁酸鈉:由x新奧（廈門）農(nóng)牧發(fā)展有限公司開發(fā)研制,主要成分為98 %的丁酸鈉,批號:040807 。
開放式雞舍單籠飼養(yǎng),飼養(yǎng)期為7 周。各試驗組的基礎日糧相同,只是分別添加不同的飼料添加劑飼喂,其他飼養(yǎng)管理方法完全一致,即按北京愛拔益加家禽育種有限公司提供的《肉用仔雞飼養(yǎng)管理
手冊》進行飼養(yǎng)管理(表1) 。
1. 2 取材
將實驗雞放血處死,剖開腹腔,迅速取出十二指腸、空腸和回腸各5 cm 左右,用新配制的生理鹽水洗干凈,放入40 mL/ L 多聚甲醛磷酸緩沖液(0. 1mol/ L ,p H7. 4) 中固定48 h 。
1. 3 染色與數(shù)據(jù)處理
常規(guī)石蠟包埋,連續(xù)橫斷切片,厚6 μm。放入用蒸餾水煮沸配制的8 g/ L 甲苯胺藍和6 mL/ L 高錳酸鉀混合液中浸染約30 s ,蒸餾水洗兩次后,用900 mL/ L 酒精分色(顯微鏡下控制) ,1 000 mL/ L酒精脫水,二甲苯透明,中性樹脂封片。光鏡下觀察肥大細胞的形態(tài)及其分布,統(tǒng)計各段小腸橫斷面全層肥大細胞的數(shù)量。應用SAS 8. 2 軟件包(SAS In2stit ute , 2001) 對統(tǒng)計的數(shù)據(jù)進行多重比較。
2、結果
2. 1 肥大細胞的形態(tài)
經(jīng)甲苯胺藍染色后,肥大細胞呈紫紅色;形狀多樣,有圓形、橢圓形或梭形,大小不一。胞漿內(nèi)顆粒豐滿,部分細胞呈脫顆粒狀。各試驗組肥大細胞的形態(tài)未見有明顯差異(圖1) 。
2. 2 肥大細胞的分布特征
各試驗組小腸的肥大細胞多存在于腸腺周圍。小腸絨毛也有肥大細胞分布,但多位于固有層中,且按小腸絨毛底部、中部、頂部依次減少。少量肥大細胞分布于肌層和漿膜層,常見于小血管和小淋巴管周圍。
2. 3 肥大細胞的數(shù)量
各組雞各小腸肥大細胞,數(shù)量見表2 。從表2 中可以看出,各組肥大細胞的數(shù)量經(jīng)數(shù)據(jù)處理存在有差異。在十二指腸,丁酸鈉組的肥大細胞數(shù)最多,對照組最少,且丁酸鈉組細胞數(shù)顯著大于對照和幼康寶兩組,但與硫酸抗敵素組差異不顯著。在空腸和回腸,丁酸鈉組的肥大細胞數(shù)量最多,并且顯著大于其他3 組,但空腸對照組、硫酸抗敵素組和幼康寶組之間沒有顯著性差異,而在回腸中硫酸抗敵素組,肥大細胞數(shù)量顯著大于對照和幼康寶兩組,但對照與幼康寶組之間差異不顯著。
比較同一組別的不同腸段的肥大細胞數(shù)量變化如圖2 所示。各試驗組中肥大細胞的數(shù)量變化趨勢基本一致,且表現(xiàn)為從十二指腸到回腸肥大細胞數(shù)量逐漸減少。
3 、討論
腸道不僅是消化、吸收營養(yǎng)物質的場所,而且具有重要的免疫功能。由于在腸道內(nèi)多種微生物形成菌叢,而腸道允許這些微生物共存的同時,可以識別侵入的有害微生物以及被黏膜上皮吸收的異己物質,并加以排除,因而腸道黏膜免疫是機體防止感染的第一道防線。腸道黏膜屏障包括機械屏障和免疫學屏障等,后者主要由腸黏膜吸收上皮細胞和腸道相關細胞構成。腸道相關黏膜免疫細胞包括淋巴細胞、杯狀細胞、肥大細胞等,其中肥大細胞是天然免疫的效應細胞之一,不僅在天然免疫中發(fā)揮重要作用,是機體抗感染免疫的第一線細胞,而且能通過所分泌的細胞因子參與獲得性免疫,所以肥大細胞是重要的免疫活性細胞。有報道指出,腸道中的肥大細胞對腸道疾病有一定的防御作用,腸道黏膜上皮首先對入侵的細菌發(fā)生反應,從而激活鄰近的肥大細胞產(chǎn)生放大效應。
本試驗在飼料中加入不同的添加劑后,發(fā)現(xiàn)不同程度地促進肉雞小腸肥大細胞的數(shù)量增加,而且丁酸鈉的影響最大,可顯著增加十二指腸、空腸以及回腸的肥大細胞數(shù)量,分別比對照組增加了19. 7 %,27. 2 %和30. 7 %;硫酸抗敵素也可增加肥大細胞的數(shù)量,比對照組的十二指腸、空腸和回腸的肥大細胞數(shù)量分別增加了13. 2 % ,4. 6 %和20. 6 %;而幼康寶對肉雞小腸肥大細胞的影響不如丁酸鈉和硫酸抗敵素的明顯,比對照組的十二指腸、空腸和回腸肥大細胞數(shù)量僅分別增加了3. 0 % ,0. 07 %和2. 6 %。這說明了丁酸鈉可顯著提高肉雞小腸肥大細胞數(shù)量,改善腸黏膜免疫水平,其效果優(yōu)于硫酸抗敵素和幼康寶。
本試驗還發(fā)現(xiàn)肥大細胞的數(shù)量從十二指腸、空腸和回腸的順序逐漸減少。有試驗表明在小鼠消化道中空腸的肥大細胞數(shù)量也多于回腸的肥大細胞數(shù)量,與本研究結果類似。但是,肥大細胞這種分布特點的生理意義還有待于進一步研究。
4、結論
在飼料中添加500 mg/ kg 的丁酸鈉、100 mg/ kg的硫酸抗敵素和500 mg/ kg 的幼康寶后,均可增加肉雞小腸肥大細胞數(shù)量,提高肉雞小腸黏膜免疫的水平,而且丁酸鈉的效果明顯好于添加硫酸抗敵素和幼康寶,所以丁酸鈉在一定程度上具有替代飼用抗生素添加劑的可行性。
